Attore esperto, cresciuto su palcoscenici teatrali, set televisivi e cinematografici, Harold Perrineau ha costruito una meritata reputazione di interprete poliedrico capace di trasformarsi da dragqueen a criminale efferato. Originario di Brooklyn, Perrineau ha studiato musica e teatro al Shenandoah Conservatory in Virginia. Ha iniziato la sua carriera come ballerino con l'Alvin Ailey American Dance Theater, seguendo la troupe per un anno e mezzo. Il passaggio graduale verso la recitazione è arrivato con "Dreamgirls" , l'acclamato "Avenue X" e una nuova produzione off-Broadway di Godspell.
Durante la sua attività sul palco, Perrineau ha cominciato a ottenere ruoli in serie televisive come I Robinson - The Cosby Show, The Days and Nights of Molly Dodd, Io volerò via - I'll Fly Away e Law & Order: Special Victims Unit. L'attività è proseguita per aprirsi al grande schermo già dalla fine degli anni '80, ma il primo ruolo di livello è arrivato con l'interpretazione di Rashid Cole in Smoke, acclamato film drammatico del 1995, diretto da Wayne Wang e scritto da Paul Auster. L'anno seguente, Perrineau ha aumentato la sua visibilità con il fiammeggiante ed esplosivo ritratto di Mercutio Romeo e Giulietta di William Shakespeare - Romeo + Juliet di Baz Luhrmann. Perrineau successivamente è apparso in numerosi ruoli da protagonista di film del calibro di Lulu on the Bridge di Paul Auster e The Best Man -la celebrata commedia romantica diretta da Malcolm D. Lee, in cui Perrineau divide lo schermo con altri membri di un gruppo che rappresenta la nuova generazione di attori Afro-Americani fra cui Taye Diggs, Morris Chestnut e Nia Long. In aggiunta alle numerose partecipazioni a film indipendenti, Perrineau ha recitato in Per incanto o per delizia - Woman on Top (2000), una commedia che lo vede come drag queen e migliore amico di una giovane donna (Penélope Cruz) che vive una serie di peripezie romantiche. Perrineau è anche apparso in 28 settimane dopo e le opere indipendenti Gardens of the Night, Your Name Here e Solo per vendetta - Seeking Justice, con Nicolas Cage, Guy Pearce e January Jones. Perrineau ha raggiunto una ancora maggior e celebrità con una serie di apparizioni in progetti d'alto livello, come un ruolo nei due ultimi episodi della trilogia di Matrix.
Da poco si è conclusa la produzione di Sabotaggio di David Ayer, insieme a Sam Worthington e Arnold Schwarzenegger. Perrineau è stato ultimamente visto nel nel film di Kathryn Bigelow, nominato per il Premio Oscar®, Zero Dark Thirty, e nella serie della TBS Wedding Band.
In aggiunta ai suoi impegni cinematografici, Perrineau è rimasto attivo in televisione con il significativo ruolo del detenuto paraplegico nell'acclamata serie HBO Oz. Il suo lavoro su Michael nella serie ABC, vincitrice di Emmy Award e Golden Globe, Lost, ha portato Perrineau un premio Screen Actors Guild nel 2006 per Miglior Performance da un Cast in una Serie Drammatica. Perrineau è stato nominato come Miglior Attore non Protagonista agli Independent Spirit Awards per il suo lavoro in Smoke, oltre a un Premio NAACP Image Award per la sua performance in The Best Man.