Ha iniziato la sua prestigiosa carriera nel varietà, al fianco di Macario, nel 1945. Subito dopo si è avvicinata al teatro di prosa, giungendo, nel breve volgere di alcune stagioni, a ricoprire ruoli principali. Assieme a Garinei e Giovannini ha interpretato una lunga serie di spettacoli primo dei quali, nel 1952, Attanasio cavallo vanesio. Nel 1954 è stata chiamata alla Biennale di Venezia in occasione dell'inaugurazione della Fondazione Cini: qui ha interpretato con successo una lunga serie di spettacoli goldoniani, tra i quali Il campiello e Le baruffe chiozzotte.

Dal reportorio classico a quello comico-brillante
Agli spettacoli del repertorio classico Lauretta Masiero ha alternato quelli del repertorio comico-brillante, sempre raccogliendo unanimi consensi, a partire da La pappa reale al fianco di Andreina Pagnani, che le fu maestra in brio e simpatia, spettacolo che la consacrò definitivamente quale interprete del repertorio brillante. Non ha tuttavia trascurato di cimentarsi anche con testi di autori drammatici, fra i quali Luigi Pirandello, del quale ha interpretato Ma non è una cosa seria e La signora Morli una e due. Ha in seguito recitato con numerose tra le maggiori compagnie del panorama nazionale, fra le quali la Masiero-Calindri-Volpi-Zoppelli, la Masiero-Lionello-Pagnani, la Masiero-Volonghi e la Masiero-Foà. Più rare le sue presenze sulla scena negli anni '70, mentre negli '80 e '90 ha portato al successo soprattutto autori anglosassoni. Dell'ultimo periodo ricordiamo: Il marito va a caccia di Georges Feydeau (1987), La cameriera brillante di Carlo Goldoni (1988), La miliardaria di George Bernard Shaw (1989), A piedi nudi nel parco di Neil Simon (1993) e Twist di Clive Exton (1995).

Tra teatro e tv
Al teatro ha alternato una vivace attività cinematografica e televisiva. Per il grande schermo ha interpretato numerosi film, tra i quali Canzoni di mezzo secolo (1952) con Renato Rascel, Accadde al commissariato (1954), Totò a Parigi (1958), Marinai, donne e guai (1958), Tipi da spiaggia (1959), Sua eccellenza si fermò a mangiare (1961) e Il viaggio di Capitan Fracassa (1990), per la regia di Ettore Scola. Altrettanto numerose la sue apparizioni televisive in spettacoli quali Canzonissima (1960-61) con Aroldo Tieri e Alberto Lionello, Biblioteca di Studio Uno (1964), Palcoscenico musicale (1966), Qui ci vuole un uomo (1968), e la serie Le avventure di Laura Storm (1965), nella quale ha impersonato una brillante investigatrice giornalista in cerca di guai. Dal 1996 Lauretta Masiero fa parte della compagnia del Teatro Stabile "La Contrada", assieme alla quale ha interpretato una fortunata edizione di Non ti conosco più di Aldo De Benedetti e Le sorelle Materassi di Fabio Storelli, spettacoli che hanno registrato entrambi un ottimo successo di pubblico e critica. Attrice a tutto tondo dello spettacolo italiano, la grandissima Lauretta Masiero miete un successo dietro l'altro da oltre cinquant'anni grazie all'impeccabile professionalità e alla innata e intramontabile verve. È passata con disinvoltura dalla rivista al teatro leggero a più impegnative prove nel teatro classico, riconfermando in ogni occasione uno stile e una bravura che fanno di lei una delle più grandi attrici italiane. Il 23 marzo 2010 il figlio Gianluca Guidi, avuto dalla relazione con Johnny Dorelli, annuncia la scomparsa della madre a 82 anni.