Cominciò la sua carriera artistica nel 1913, quando a Varsavia fece le sue prime apparizioni sul palcoscenico. Nel 1914 debuttò sullo schermo nel film Raba strastei, raba poroka. Tre anni dopo l'impresario teatrale Max Reinhardt la chiamò in Germania, e lì, il regista cinematografico Ernst Lubitsch, la volle in diversi film, come Die Augen der Mumie Ma (Gli occhi della mummia, 1917), Carmen (Sangue gitano, 1918), Madame Dubarry (Madame Dubarry, 1919) e Sumurun (1920). Dopo il suo arrivo in America, Pola Negri e Lubitsch si sarebbero ritrovati ancora in un film: Forbidden Paradise (La zarina, 1924), che fu un grande successo. Giunta a Hollywood nel 1923, conobbe un notevole successo grazie al suo stile inconfondibile e alle sue non comune doti drammatiche. Nel 1921 intanto, l'attrice aveva divorziato dal suo primo marito, Eugene Dambski, col quale aveva vissuto dieci anni. In seguito venne ingaggiata per recitare con il grande Rodolfo Valentino, col quale visse un'intensa storia d'amore, tutt'oggi discussa. Il suo secondo matrimonio fu col principe russo Serge Mdivani, nel 1927, che durò però solo quattro anni. Nel 1927 fu sublime nell'interpretazione della cameriera che si innamora di soldato in Hotel Imperial (L'ultimo addio, 1926) di Mauritz Stiller. Nel 1930 Pola Negri tornò in Europa dove prese parte a qualche film di scarso rilievo. Tornò in America durante la guerra e apparve nella parte di una cantante d'opera in Hid Diddle Diddle (1943). La sua ultima interpretazione è stata quella di Madame Habib in The Moon-Spinners (Giallo a Creta, 1964). Nel 1970 pubblicò la sua autobiografia, intitolata Memoirs of a Star. Negli ultimi anni visse ritirata, concedendo solo qualche altra apparizione in pubblico, fino alla sua morte avvenuta nell'agosto del 1987, a novantadue anni.