Attore e sceneggiatore, Eugene Levy gode di un pubblico numeroso ed eterogeneo, fatto di giovani e meno giovani. Nei primi anni ’70, dopo aver lavorato per due anni nella nota compagnia teatrale Second City di Toronto, Levy ha fatto parte dell’équipe che ha ideato, scritto e interpretato il programma Second City Television (SCTV) per la tv Canadese. Trasmesso anche negli Stati Uniti, SCTV è diventato un programma di culto. Nel 1981, quando è stata trasmessa l’ultima puntata, la NBC ha riacquistato il programma in una versione ampliata, intitolata SCTV Network 90, che è rimasta in palinsesto fino al 1983. Oltre ad essere uno dei protagonisti del programma, Levy ha vinto due Emmy come co-autore dei testi..

Nel 1989 ha diretto lo speciale televisivo I, Martin Short, Goes Hollywood. Poco dopo ha diretto il suo primo film per il cinema, Sette criminali e un bassotto, con John Candy e Jim Belushi. Ha anche diretto i telefilm Sodbusters e Partners ‘n Love, di cui è stato anche rispettivamente produttore esecutivo, co-sceneggiatore e interprete.
Nel 1996, in coppia con il regista Christopher Guest, Levy ha scritto la sceneggiatura di Sognando Broadway, di cui è stato anche interprete. Insieme hanno girato anche: Campioni di razza (2000), per cui sono stati candidati al Writers Guild of America Award e al Golden Globe; A Mighty Wind (2003), per cui sono stati candidati come sceneggiatori a un Independent Spirit Award, e per cui Levy è stato votato Miglior attore non protagonista dal New York Film Critics Circle; e For Your Consideration (2006), per cui tutto il cast è stato candidato al Gotham Award.
Ha recitato nel film campione d’incassi American Pie, di Paul e Chris Weitz, riprendendo il suo ruolo (padre di Jim) nei vari sequel. Tra i numerosi altri titoli di Levy ricordiamo Splash – una sirena a Manhattan di Ron Howard, National Lampoon’s Vacation, Club Paradise e Mi sdoppio in quattro di Harold Ramis; Il padre della sposa, Inviati molto speciali e Il padre della sposa 2 di Charles Shyer e Nancy Meyers; Un ciclone in casa e Il ritorno della scatenata dozzina di Adam Shankman e, più di recente, Una notte al museo 2: La fuga di Shawn Levy.
Tra i film di animazione cui ha prestato la voce ricordiamo Heavy Metal di Gerald Potterton, Curious George di Matthew O’Callaghan, Over the Hedge di Tim Johnson e Karey Kirkpatrick e Astro Boy di David Bowers.