Si è imposto velocemente tra gli attori emergenti più richiesti di Hollywood grazie alla combinazione vincente di fascino, talento e intensità. Attualmente Ackles è tra gli interpreti della serie televisiva di successo Supernatural, interpretata anche da Jared Padalecki. Ackles interpreta Dean Winchester, un brusco ragazzaccio che si unisce al fratello minore (Padalecki) per combattere contro le forze maligne soprannaturali. La serie è arrivata alla quarta stagione.
Ackles è nato a Dallas ed è cresciuto a Richardson, nel Texas. Nel 1997, ha iniziato la carriera da attore interpretando Eric Roman Brady in Days of Our Lives, interpretazione acclamata dalla critica che gli è valsa tre candidature ai premi Emmy® daytime e un premio Soap Opera Digest come Migliore Interprete Esordiente Maschile nel 1998.
Restando al piccolo schermo, ricordiamo anche il ruolo di Jason Teague in Smallville,; Alec/X5-494 in Dark Angel della Fox e C.J. in Dawson's Creek. Inoltre ha interpretato la miniserie Blonde accanto a Patrick Dempsey e Poppy Montgomery.
Passando al grande schermo, Ackles ha debuttato nel film dell’orrore di David Winkler Devour prodotto dalla Sony Pictures. Ha interpretato di recente il film in uscita di David Mackay Ten Inch Hero, romantica commedia sexy sugli amori contrastati di un gruppo di giovani che lavorano insieme in un negozio di attrezzature subacquee a Santa Cruz, CA.
Attualmente Ackles vive a Los Angeles.
