Batman e Nightwing scoprono che Poison Ivy e Jason Woodrue, alias l'Uomo Floronico, sono in combutta e tentano di scatenare una catastrofe di proporzioni globali. Questo costringe i supereroi, nonostante la riluttanza, a cercare la loro acerrima nemica Harley Quinn, nel tentativo di fermare il malvagio piano di Poison Ivy: trasformare le persone in piante. Grande amica dei due criminali, la giovane si è ritirata dalle scene per lavorare in un ristorante e dimenticare il passato da supercattiva. Nel frattempo Batman scopre che Ivy e Woodrue hanno rapito uno scienziato che potrebbe aiutarli a trasformare tutti gli esseri umani in vegetali. Con l'aiuto di Harley, Batman e Nightwing tenteranno di fermare il diabolico piano di contaminazione, in una missione messa a dura prova dall'imprevedibile e inaffidabile Harley.

Anche se ne riprende fedelmente lo stile dell'animazione, il film diretto da Sam Liu non è ufficialmente un sequel dell'universo creato da Bruce Timm, concluso nel 2006 con Justice League Unlimited. Nel cast troviamo Kevin Conroy, voce di Batman nella versione originale, e Melissa Rauch voce di Harley Quinn.