Dopo aver incassato 575 milioni di dollari in tutto il mondo con il primo film, il regista Shawn Levy sta finendo la post-produzione di Una notte al museo 2 ambientato questa volta all'istituto Smithsonian di Washington, al National Air and Space Museum e al Lincoln Memorial. Larry Daley (Ben Stiller), non è più il guardiano di notte del museo, in cui ha lavorato in Una notte al museo, ma è diventato il CEO di una compagnia di gadget. In questa seconda avventura si recherà a Washington per recuperare i suoi amici e pezzi del museo, Octavius (Steve Coogan) e Jedediah (Owen Wilson) spediti erroneamente allo Smithsonian. La sua ricerca verrà complicata dalla presenza di nuovi artefatti tornati in vita: l' Onesto Abe, il generale Custer, Albert Einstein e una piovra gigante e dai piani del malvagio faraone Kahmunrah (Hank Azaria), intenzionato a conquistare il mondo con l'aiuto di Ivan il Terribile (Christopher Guest). Tra tutto questo trambusto il personaggio interpretato da Stiller, farà un viaggio per rivendicare se stesso, perché ha perso la sua peculiarità, la capacità di divertirsi e meravigliarsi per ciò che lo circonda. Naturalmente Levy ha grosse speranze per Una notte al museo 2, confessa che ci sono voci per un altro capitolo e che amerebbe farlo, ma parlare di un terzo film è ancora prematuro.