Stephen Guarino ha recentemente lavorato in An Englishman in New York e in Confessions of a Shopaholic.
Guarino ha recitato in teatro come attore comico fin dall'età di diciassette anni. Originario di Orlando, Florida, ha cominciato con la famosa SAK Comedy LAB, con la quale ha ottenuto un BFA dalla Florida State University. In seguito è stato co-fondatore del Dad's Garage Theatre Company ad Atlanta. Dopo essersi trasferito a New York City, Guarino è stato coautore del successo off-Broadway "The Nuclear Family", un musical totalmente improvvisato, insieme ai suoi partner di sempre, Bennett, John Gregorio e Matthew Loren Cohen. Il programma è stato poi sviluppato per la televisione in un pilota chiamato The Extended Family, per la TV Lab della Viacom, andato in onda sul canale Sundance Channel. In seguito c'è stata un'altra serie, The Big Gay Sketch Show (2006), prodotto da Rosie O'Donnell, che ha fatto conoscere la comicità di Guarino a tutto il mondo del cinema.
Ha anche lavorato per la televisione in alcuni episodi della serie The Wedding Bells e Law & Order: Special Victims Unit. Ha inoltre interpretato alcuni ruoli in film per la televisione e in film per il video, fra cui The Clique, Last Men on Earth, The Year That Trembled, A Full Cup e L.A. Take-Out.
Nel 2010 interpreta Bill nel film di Nia Vardalos 5 appuntamenti per farla innamorare.