Nata in una famiglia circense (i suoi genitori erano due acrobati), Florence Lake e suo fratello Arthur (indimenticabile interprete, negli anni Quaranta e Cinquanta, del personaggio di Dagwood nella famosissima serie radiofonica, televisiva e cinematografica, intitolata Blondie) cominciarono ad esibirsi sul palcoscenico prima ancora di imparare a leggere e scrivere. Florence Lake debuttò sullo schermo a soli dodici anni in alcuni film della Fox, i cui protagonisti erano proprio dei bambini. Nel 1929 fece il suo debutto nel cinema sonoro, e nel 1932 cominciò ad interpretare una serie di cortometraggi per la RKO, in cui vi impersonava la pedante, svanita e ciarliera moglie di Edgar Kennedy. Questa divertentissima serie durò fino al 1948 (anno della morte di Kennedy), e diede l'opportunità a Florence Lake di dimostrare tutto il suo vivace e spigliato talento di attrice comica. In altre occasioni si distinse come ottima caratterista, e negli anni Cinquanta cominciò una brillantissima carriera televisiva, che la vide eccellente comprimaria in indimenticabili serie tv, fra le quali ricordiamo The Lone Ranger (Il ranger solitario), in onda dal 1949 al 1957, e Lassie (Lassie), in onda dal 1954 al 1974. Si spense serenamente all'età di settantacinque anni.