Gli esordi
Nato il 21 aprile 1963 nel Canada francofono, Roy Dupuis è figlio di un'insegnate di piano e di un venditore della Canada Packers. Dopo il liceo inizia a studiare teatro a L'école nationale du théâtre du Canada laureandosi nel 1986. Si dice che l'iscrizione all'accademia avvenne in modo accidentale, prendendo la parte di un amico che aveva accompagnato ai provini di ammissione e impressionando il direttore della scuola pur non essendo il vero candidato. Roy Dupuis intendeva diventare un fisico. Grazie al perfetto bilinguismo inizia una carriera come attore in Canada come negli Stati Uniti a partire dal 1988. Appare in televisione in Le grand jour (1988) ma il primo ruolo importante è nel 1989 per Come fare l'amore con un negro senza stancarsi di Jacques Benoit. Lo stesso anno lo vede interprete in Jésus de Montréal di Denys Arcand. Nel 1990 partecipa a una serie di successo in Canada: Les Filles de Caleb interpretando il marito della protagonista Emile. Appare poi nella serie Scoop (1992) ma il vero successo sarà grazie alla parte di Yves in Being at Home with Claude di Jean Beaudin, film che sarà in selezione ufficiale a Cannes nel 1992.

Tra il francese e l'inglese
Nel 1995 appare in Screamers - Urla dallo spazio, film di fantascienza e più tardi in Hemogoblin - Creature dall'inferno (1998). E' anche in In fuga col malloppo (1998), tutti ruoli che gli aprono le porte per la serie Nikita (1997-2001) in cui interpreta Michael Samuelle. Partecipa poi alla miniserie Le dernier chapitre (2002) e al remake di un classico canadese: Séraphine: un homme et son péché (2002). Nel 2003 appare ne Le invasioni barbariche di nuovo per Denys Arcand, uno dei più grandi successi canadesi degli ultimi anni. Interpreta poi la star canadese di hockey Maurice Richard nel film omonimo nel 2005 mentre appare nell'indipendente The beatiful somewhere e nel film sul genocidio in Ruanda, Shake Hands with the Devil(2006). Nel 2007 sarà invece in Emotional Arithmetic accanto a Gabriel Byrne e Max Von Sydow. Il 2008 lo vede nel ruolo dell'amico canadese, Jean-Paul Mercier, del gangster Mesrine in Nemico pubblico N.1, l'ottimo film di Jean-Francois Richet. Nel film Dupuis partecipa all'incredibile attacco alla prigione di massima sicurezza insieme a Mesrine.